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Percoll細(xì)胞分離液(Pharmacia)
  • 產(chǎn)品型號(hào):17-0891-01
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2025-05-01
  • 訪  問  量:5028
簡(jiǎn)要描述:

產(chǎn)品名稱:Percoll細(xì)胞分離液(Pharmacia) 17-0891-01 英文名稱: Percoll 產(chǎn)品貨號(hào): 17-0891-01 產(chǎn)品規(guī)格: 100ML 1L 試劑級(jí)別: 試劑級(jí) 產(chǎn)品產(chǎn)地: USA 產(chǎn)品商標(biāo): Pharmacia

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Percoll細(xì)胞分離液(Pharmacia) Percoll細(xì)胞分離液(Pharmacia) 

Percoll不連續(xù)密度梯度沉淀法分離純化淋巴細(xì)胞和淋巴母細(xì)胞
(一)原理
Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達(dá)1.3g/ml密度,采用預(yù)先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,Percoll不穿透生物膜,對(duì)細(xì)胞無毒害,因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒,還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。
(二)操作方法及注意事項(xiàng)
1.不同濃度(密度)Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
Percoll濃度(%)  70       60      50      40       30    20
比重g/ml           1.090      1.077      1.067    1.056     1.043     1.031
 2.不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長(zhǎng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時(shí)相鄰兩層Percoll比重相差不大時(shí),可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
 3.裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異,一般加樣體積不宜過大,細(xì)胞濃度也不可過高,否則會(huì)影響細(xì)胞的分離和回收。
 4.離心:一般采用離心力為400g,時(shí)間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢,要平穩(wěn)。
 5.取樣:當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí),可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細(xì)胞;有時(shí)大部分細(xì)胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測(cè)用。

 

Percoll 細(xì)胞分離液Pharmacia100ml

 

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