FICOLL PLUS 不連續(xù)密度梯度分離液使用說明
FICOLL PLUS 不連續(xù)密度梯度分離液使用說明
技術(shù)文檔編號：TBD0054SOP
ICLL PLUS不連續(xù)密度梯度分離液與梯度制備稀釋液配比稀釋后，可形成不同濃度（密度）梯度分離液，經(jīng)低速（200-1000g）離心于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)可達(dá)到滿意的細(xì)胞分離效果。FICOLL PLUS 不連續(xù)密度梯度分離液不穿透細(xì)胞，無毒害，成功的用于動物細(xì)胞的分離。
試劑組成
名稱：FICOLL PLUS 密度梯度原液 貨號：P1114 100ml 梯度制備稀釋液 100ml
【簡介】
FICOLL PLUS 不連續(xù)密度梯度分離液與梯度制備稀釋液配比稀釋后，可形成不同濃度（密度）梯度分離液，經(jīng)低速（200-1000g）離心于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)可達(dá)到滿意的細(xì)胞分離效果。FICOLL PLUS 不連續(xù)密度梯度分離液不穿透細(xì)胞，無毒害，成功的用于動物細(xì)胞的分離。
【操作方法】
- 不同濃度（密度）分離溶液的制備，使用梯度制備稀釋液參考下表將原液稀釋至所需濃度：
原液濃度（%） | 80 | 67 | 56 | 45 | 32 | 20 |
比重（g/ml） | 1.090 | 1.077 | 1.067 | 1.056 | 1.043 | 1.031 |
- 梯度分離層的制備：將梯度分離液由高密度至低密度逐層加入至離心管內(nèi)，加入后應(yīng)可見明顯的梯度界面。
- 上樣：根據(jù)不同目的細(xì)胞，加入不同體積血液樣品或單細(xì)胞懸液（樣本體積及細(xì)胞濃度不宜過高，否則影響細(xì)胞的分離及回收）。
- 離心：400-600g 離心 20-30min。根據(jù)不同樣本個(gè)體差異及目的細(xì)胞特點(diǎn)，用戶可適當(dāng)調(diào)節(jié)離心力及離心時(shí)間（離心力zui大不超過 1000g）。
- 取樣：當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí)，可逐層去除分離溶液后收集界面部位的細(xì)胞;有時(shí)大部分細(xì)胞位于分離液層中,則需要逐層收集。收獲含有分離液的細(xì)胞經(jīng) 2 次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。
【注意事項(xiàng)】
- 實(shí)驗(yàn)全過程需在 20℃±2℃下進(jìn)行，否則影響離心效果。
- 由于多層分離溶液之間密度差別不大，因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢，要平穩(wěn)。
- 試劑瓶蓋需蓋緊，防止蒸發(fā)和污染。
【儲存條件及有效期】常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【特殊細(xì)胞分離試劑盒舉例】
1. 富含 NK 活性大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)的純化試劑盒（產(chǎn)品貨號：NK2011H）
- 淋巴母細(xì)胞純化和死細(xì)胞去除試劑盒（產(chǎn)品貨號：P1114B）
- 【人不同血細(xì)胞的漂浮密度】
細(xì)胞 | 漂浮密度 | 細(xì)胞 | 漂浮密度 |
紅細(xì)胞 | 1.090-1.110 | 淋巴細(xì)胞 | 1.052-1.077 |
粒細(xì)胞 |
| B 淋巴細(xì)胞 | 1.062-1.075 |
嗜酸性 | 1.090-1.095 | T 淋巴細(xì)胞 | 1.065-1.077 |
嗜中性 | 1.080-1.085 | 淋巴母細(xì)胞 | 1.065-1.077 |
單核細(xì)胞 | 1.050-1.066 | 自然殺傷細(xì)胞 | 1.050-1.070 |
血小板 | 1.030-1.060 |
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